地区：上海市 宝山区
关键词：浙江理工大学;浙江大学;南京工业大学;浙江省动物疫病预防控制中心
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000005086
成果描述：
| 病毒的发生日益猖獗，其对社会和人类造成的危害也不断加重。黄瓜花叶病毒(CMV)是世界上发生最普遍和危害最严重的植物病毒之一。混合感染猪圆环病毒等多种病毒性病原感染在中国猪繁殖障碍疾病和猪呼吸道疾病的发生和流行中扮演着重要角色。人们对该类病毒已有一定的认识，然而由于该类病毒的致病机理还不清楚，不能对病害进行有效控制和治疗。病毒感染的诊断以经典血清学方法、现代免疫学技术和分子生物学方法为主，但在对那些遗传变异较频繁的病毒感染进行诊断时，这些方法的工作程序复杂，不利于快速诊断。PCR技术应用以来，其高灵敏度为病毒感染的诊断提供了一个有力工具，但每次只能确定或排除一种或几种病菌。因此，发展快速、灵敏、高通量的病毒检测技术并进行病毒致病机理的研究对病毒性疾病的预防和控制具有重要的意义。与传统的分子生物学技术相比，基因芯片技术最大的特色在于其高通量检测。现有的病毒芯片检测技术，绝大部分只能针对一类病毒，但是通过基因芯片来同时检测不同类病毒及其亚型，鲜见有报道。该项目选取马铃薯病毒和猪病毒分别作为模式系统，建立了具有灵敏度高、特异性强、多重检测水平和通用性等优势的新型LDR寡核苷酸芯片检测方法；针对数量较少的混合感染病毒，该项目分别建立了几组不同类型的多重PCR方法，以六种马铃薯病毒为模式系统首次将新型的荧光染料EvaGreen应用至实时定量PCR和熔解曲线分析进行多病原的灵敏检测、快速鉴定和定量分析，在荧光信号强度、熔解曲线分辨率和检测灵敏度上有显著提高，且可在一个反应体系同时检测六种病毒，高于SYBR Green实时PCR最多三个目标对象。同时建立了一种可同时检测CMV等RNA病毒的多重RT-PCR，检测灵敏度比双抗三明治ELISA高100倍。通过原位合成技术构建了番茄-CMV基因表达谱芯片和植物miRNA检测芯片，通过CMV侵染番茄基因的时序表达分析进一步揭示了CMV侵染番茄不同时期所诱导的基因表达情况，通过芯片杂交实验，获得了56条番茄保守性miRNA，它们分属于11个miRNA家族，其中9个miRNA家族在所研究的番茄生长过程中发生了差异性表达。为进一步研究病毒-寄主关系提供了新的分子基础。项目共申报专利6项，受理4项；授权2项；发表省级以上刊物研究论文16篇，其中SCI论文10篇。项目解决了提升和改进了现有的检测技术，建立了具有灵敏度高、特异性强、多重检测水平和通用性等优势的新型LDR寡核苷酸芯片检测方法和多重PCR检测技术，同时研究了植物miRNA在CMV与寄主互作中的作用，具有较好的创新性，项目选题正确，研究深入，结果可靠，已到达国内先进水平。 |
