地区：上海市 宝山区
关键词：河北省人民医院
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000004115
成果描述：
| 课题采用分子克隆技术制备蛋白转导结构域TAT与HO-1融合蛋白(TAT-HO-1)，通过建立大鼠肝脏缺血/再灌损伤模型、供肝冷保存模型及原位肝移植模型，评价TAT-HO-1用于大鼠肝脏缺血/再灌损伤、供肝冷保存及原位肝移植中的抗氧化、抗炎症、抗凋亡及诱导免疫耐受的有效性，并对其应用时机、剂量及作用机制进行探讨。属于麻醉学器官保护领域。采用分子生物学技术将HO-1 cDNA编码区及合成的TAT片断与原核表达载体pET32a连接，构建了TAT-HO-1-pET32a质粒，将测序结果与标准序列进行比对，证实TAT-HO-1-pET32a质粒测序正确。用测序正确的TAT-HO-1-pET32a质粒转染E.coli BL-21，经诱导表达和纯化后，Western blot证实TAT-HO-1蛋白制备成功。经过细胞毒性测定和酶活性测定证实所得蛋白无细胞毒性，具有一定酶活性，为进一步实验奠定基础。分别应用荧光显微镜、Westernblot以及免疫组化等方法证实TAT-HO-1蛋白可成功转导进入离体培养的肝细胞，并且可在缺血/再灌注后、冷保存期间及肝移植后成功转导进入大鼠肝脏。通过建立大鼠肝脏缺血/再灌损伤模型、供肝冷保存模型及原位肝移植模型，证实TAT-HO-1可成功转导进入肝细胞，并减轻大鼠肝脏缺血/再灌损伤、冷保存及原位肝移植导致的细胞凋亡、氧化应激及炎症反应，增加移植肝脏VEGF表达，诱导免疫耐受，提高肝移植生存率，对肝功能具有保护作用。该研究成功制备蛋白转导结构域TAT与HO-1的融合蛋白，将蛋白转导技术应用于肝移植中，为减轻肝移植缺血/再灌损伤提供了新方法，对改善移植肝脏功能，降低肝移植患者死亡率，具有重要指导意义。 |
