地区：上海市 宝山区
关键词：皖南医学院
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000004046
成果描述：
| 血浆蛋白质C（Protein C，PC）是一种维生素K依赖性的糖蛋白，在正常人体血浆中可被凝血酶-血栓调节蛋白(T-TM)复合物激活为活化蛋白C（APC）并发挥重要的抗凝作用，调节机体凝血平衡。当这种系统的功能下降或减退时，患者易并发血液高凝状态、血栓形成（心肌梗死、自发性深静脉血栓等）以及促进肿瘤转移等。因此，临床上适时准确的检测血浆蛋白C含量与其活性是早期诊治该类疾病的一个重要手段，但传统的蛋白C活性测定方法存在繁琐、重复性差等缺陷，如活化时间长、不能直接用血浆进行测定、必须采用较为繁琐的中和步骤来消除凝血酶的干扰。上世纪九十年代末，瑞士Pentapharm公司等利用铜头蝮蛇毒PCA生产了人血浆C活性诊断试剂（Protac），避免了多种干扰因素，具有活性完全、特异性强，且操作简便、可重复性好，但因价格昂贵，限制了国内临床应用的范围。尽管蛇毒研究是生物毒素领域研究的热点，但对蛇毒的利用较差，据文献报道，除白眉蝮蛇毒外，中国主要几种蛇毒粗毒都有较多的积压，如眼镜蛇毒、蝮蛇毒和五步蛇蛇毒等，蛇毒中有用成份利用率不到15%。蛇毒制药是国内有知识产权的药物，开发蛇毒药品或生物诊断试剂符合国家和企业的长期利益，具有非常重要的社会意义和经济价值，其市场前景广阔。 皖南医学院蛇毒蛇伤研究所专业从事蛇毒研究三十余年,取得显著的成绩,是国内为数不多的蛇毒研究机构之一。2011年，获得安徽省教育厅自然科学研究基金的资助，2014年底完成项目研究。主要开展了四个方面的工作：利用离子交换柱层析与凝胶过滤及液相色谱技术，从皖南地区蛇毒（蝮蛇和五步蛇）粗毒中获取一种高纯度的血浆蛋白C激活剂（PCA）活性蛋白质成分，其相对分子质量为24kd，从2011年5月至2013年9月共分离纯化了12个批次的PCA；确定了蛇毒PCA分离纯化制备工艺和质控平台，解决了PCA分离纯化的质量稳定性问题；确定了PCA理化特性、作用效价和稳定的制备工艺流程。利用毛细管区带电泳技术分析了蛇毒PCA与血浆蛋白C的相互作用，发现蛇毒PCA在短时间内可与蛋白C充分结合，直接促进蛋白C的构象改变暴露活性中心而发挥催化作用，为临床应用PCA方便快捷的检测血浆蛋白C活性提供了重要的依据。确定了特异性发色底物。血浆蛋白C在PCA作用下被激活生成活化蛋白C，活化蛋白C再水解特异性发色底物并释出对硝基苯胺（PNA），PNA在波长405nm处有强吸收峰，PNA的显色OD值与PC活性的高低成正比关系，寻找特异性发色底物是非常困难的工作，该项目经百余次实验并与生物技术公司的合作，解决了这一问题。通过对实验动物模型和临床血样标本的研究测定，证实了所制备的血浆蛋白C活性检测试剂盒的有效、方便和稳定性，并建立了相应的诊断标准。 血浆蛋白C活性诊断试剂的研制成果在形成产品后将可替代进口产品，因其价格低廉，可在临床广泛推广。这不仅对血栓性疾病患者的诊断、预警、预后都有非常积极的作用，同时对于开发和利用皖南地区丰富的蛇毒资源以及本地生物药业的发展具有重要意义。 |
