豇豆花叶病毒属病毒通用RT-PCR检测及其在种类鉴定上的应用

地区:上海市 宝山区

关键词:厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心

成果类型:其它

成果领域:生物与新医药

成果编号:A2021061000002659

成果描述:

豇豆花叶病毒属(Comovirus)属于伴生豇豆病毒科(Secoviridae)、豇豆花叶病毒亚科(Comovirinae),由15个确定种、1个暂定种病毒组成,豇豆花叶病毒(CPMV)是其代表种。其中3种病毒为中国禁止进境的检疫性有害生物,11种病毒还未在中国报道发生,在进境植物检疫中具有十分重要的检疫重要性。该项目利用生物信息学方法设计简并引物,通过条件优化、特异性和灵敏度等方面研究,建立豇豆花叶病毒属的通用RT-PCR检测方法,成功用于9种豇豆花叶病毒属病毒14个分离物的检测;利用常规测序引物,实现PCR产物直接测序方法;结合序列分析,实现豇豆花叶病毒属种类的快速鉴定。根据南瓜花叶病毒(SqMV)外壳蛋白(CP)基因设计特异引物,建立了SqMV的SYBR Green I实时荧光RT-PCR检测方法,具有良好的重现性、特异性和灵敏性,适用于进出境植物繁殖材料的快速检测及田间病害的实时监测。根据复制酶的保守区域设计简并引物,建立豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属通用RT-PCR检测方法。该方法可用于9种豇豆花叶病毒属病毒、2种蚕豆病毒属病毒共计17个分离物的检测,具有出良好的广谱性和特异性。利用该方法首次测定了蚕豆染色病毒(BBSV)部分RdRp基因序列,并首次证实蚕豆萎蔫病毒2号侵染中国太子参。该项目申请国家发明专利2项(已授权1项),发表论文2篇,申请制定检验检疫行业标准1项。
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