地区：上海市 宝山区
关键词：河南省肿瘤医院;中国人民解放军第一五五中心医院
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000002396
成果描述：
| 项目所属科学技术领域：肝癌复发和转移。主要内容：目的：探讨miR-10b在肝癌侵袭转移中的调节作用及其分子机制，旨在从新的角度阐明肝癌转移的机制，为寻找新的肝癌治疗靶点提供理论依据。方法：该研究选择58例肝癌和10例正常肝组织标本，qRT-PCR检测miR-10b表达，分析miR-10b表达与临床病理特征及预后的关系。将化学合成的miR-10b模拟体(mimics)瞬时转染至低表达miR-10b的HepG2细胞，瞬时转染miR-10b抑制剂(antagomir)至高表达miR-10b的MHCC97H细胞，检测转染后侵袭和迁移能力的变化，免疫荧光染色观察细胞骨架的变化。利用miRanda和PicTar靶基因预测软件，筛选出miR-10b可能的下游靶基因CADM1。荧光素酶报告试验验证miR-10b对CADM1的负性调控作用。过表达或抑制miR-10b后利用qRT-PCR和免疫印迹实验检测靶CADM1 mRNA和蛋白水平的改变。利用RNAi技术降低肝癌细胞中CADM1的蛋白表达水平，观察肝癌细胞的增殖(MTT法)、迁移(Transwell方法)和侵袭(Matrigel实验)等生物学行为的变化。结果：与正常肝组织对比，转移组与非转移组的肝癌组织中miR-10b表达均有一定程度上调，在转移组肝癌组织中miR-10b表达水平上调程度尤为明显(P﹤0.05)。miR-10b表达与肝癌转移(P﹤0.01)、AJCC分期(p=0.016)明显相关，而与年龄、性别、乙肝、肝硬化、肿瘤大小、数目及分化无明显相关；miR-10b的高表达提示肝癌预后不良(P﹤0.01)，并且是影响肝癌患者总体生存的独立风险因素(p=0.016)。在体外miR-10b对肝癌细胞的迁移和侵袭有明显的促进作用，且影响细胞骨架重组，但对增殖、细胞周期、凋亡无明显影响。生物信息学预测提示，CADM1可能是miR-10b的靶基因，过表达或抑制miR-10b对CADM1 mRNA无明显影响，但对其蛋白水平有负性调节作用。用siRNA下调CADM1的表达，也能促进肝癌细胞的迁移和侵袭、影响细胞骨架的重组，与miR-10b过表达相似。从而证实了miR-10b通过转录后水平调控CADM1参与肝癌的侵袭和转移。结论：miR-10b在肝癌组织中尤其是发生转移的肝癌组织中表达明显上调，与预后相关，miR-10b通过转录后水平调控CADM1表达从而发挥其促肝癌转移作用。miR-10b和CADM1均有可能成为肝癌治疗的新潜在的靶点。 |
