地区：上海市 宝山区
关键词：广西中医药大学第一附属医院
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000002019
成果描述：
| 研究内容及研究方法：研究内容:人鼻咽癌细胞株体外培养，分选CD133＋细胞，并作CD133＋肿瘤细胞体外增殖及分化能力测试和分化各阶段肿瘤细胞LYVE-1、P120ctn免疫细胞染色。收集人的鼻咽部癌组织标本40例和鼻咽部慢性炎组织标本20例，石蜡包埋制片，做H.E染色和免疫组化法检测CD133、LYVE-1和P120ctn的表达情况，从形态学及分子病理学角度分析结果。研究方法：人鼻咽癌细胞株（CNE2Z）体外培养，应用免疫细胞化学观察、流式细胞仪检测，及免疫磁珠技术方法分选CD133＋细胞，并作CD133＋肿瘤细胞体外增殖及分化能力测试，及分化各阶段肿瘤细胞LYVE-1、P120ctn免疫细胞染色。收集人的鼻咽部癌组织标本和鼻咽部慢性炎组织标本，石蜡包埋制片，做H.E染色和免疫组织化学方法检测CD133、LYVE-1、和P120ctn的表达情况，从形态学及分子病理学角度分析结果。科学发现和创新：作者掌握的国内外文献中没有鼻咽癌肿瘤干细胞CD133表达和LYVE-1、P120ctn关系研究的报道。鼻咽癌是广西多发病，该研究结果对鼻咽癌肿瘤干细胞后续研究、为鼻咽癌的靶向治疗，特别是为中医、中药干预肿瘤干细胞研究积累经验。肿瘤干细胞研究主要在细胞培养方面，在组织中作免疫组化检测属首创，该技术为肿瘤干细胞研究提供更简单、实用方法。分析CD133、LYVE-1、P120ctn表达与鼻咽癌的病理分型、分期、转移关系，探讨鼻咽癌肿瘤干细胞的特性。主要研究结果：人鼻咽癌细胞株（CNE2Z）体外培养，分选CD133＋细胞，流式细胞仪检测CNE2Z细胞株中CD133+所占比例为0.1%～0.2%，纯度为（87.2±3.24）。CD133+肿瘤细胞体外分化能力0、2、4、8、12d用流式细胞仪动态测试133+细胞的的百分比为87.2%、0.12%、0.11%、0.14%、0.1%。LYVE-1有表达（P＜0.05），P120ctn有表达（P＜0.05），但不同时期表达没有线性关系。40例鼻咽癌组和20正常粘膜组CD133表达弱阳性。鼻咽癌组织LYVE-1的表达，淋巴管密度为21.10±4.32，正常粘膜组为10.01±1.56，差异具有显著性（P＜0.01)。P120ctn表达高于正常组织（P＜0.05）。结论：应用流式细胞术检测发现，在鼻咽癌细胞株CNE2Z细胞中存在CD133微量表达，其比例恒定在0.1%-0.2%。用免疫磁珠分选技术可以获得微量表达的CD133+细胞的分选，经鉴定分选的纯度达到（87.2±3.24）。P120ctn与LYVE-1在鼻咽癌细胞株中有表达，且不同时期表达没有线性关系。鼻咽癌组织中P120ctn与LYVE-1的表达明显高于正常鼻咽粘膜上皮。III～IV期鼻咽癌组织P120ctn的阳性表达率及LYVE-1的LVD明显高于I～II期鼻咽癌组织，均具有统计学意义（P＜0.01）。LYVE-1、P120ctn高表达鼻咽癌患者生存率较低。LYVE-1、P120ctn可作为判断鼻咽癌生物学特征和预后的重要指标之一。成果的科学意义和应用前景：鼻咽癌在广西和广东地区发病率最高,虽然鼻咽癌的治疗方法及疗效较以前有了较大的进步，但仍未达到理想的效果。其很关键的一点就是：鼻咽癌在发病早期就已经发生了淋巴道转移，故弄清鼻咽癌淋巴道转移的影响因素，对鼻咽癌的早期诊断、治疗及预后的判定均有非常重要的意义。课题组希望通过对CD133+、P120ctn与LYVE-1等进行更深入的研究，帮助课题组更清楚的认识鼻咽癌的发生、发展、浸润、转移机制，了解其与患者远期生存率的关系。更重要的是希望二者能像Ki-67、AFP、CK、ER、PR等许多抗体一样应用于临床病理诊断中，并能帮助临床医生确定治疗方案，并判断患者的预后等。计划的完成情况与存在的问题：该课题已达到预期计划和目标。随着研究的不断深入，该课题采用细胞培养、流式细胞术、免疫细胞和免疫组化法研究鼻咽癌细胞培养株及鼻咽癌组织CD133、LYVE-1、P120ctn表达情况，探讨三者与鼻咽癌组织学类型及临床分期、复发间的关系。试图从肿瘤干细胞环节阐述鼻咽癌发生、转移和复发的机制。同时为研究肿瘤干细胞及后续中药干预肿瘤干细胞研究积累前期经验，也可能为鼻咽癌的靶向治疗提供新的途径。 |
