地区：上海市 宝山区
关键词：绍兴市人民医院
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000001817
成果描述：
| 研究开发的主要内容：1．以多西他赛（Docetaxel，DTX）为诱导剂，采用低浓度持续加药法诱导细胞产生耐药性，建立耐药细胞株。选取一系列型号的Pluronic（P85、P105、P123、F68、F127），作用于耐药细胞，考察其对耐药细胞的影响。2．将Pluronic活化一端羟基，将其连接到高分子量聚乙烯亚胺（PEI 25kDa）上，得到一种新的阳离子聚合物；或将Pluronic两端的羟基进行双活化，采用化学交联的方法连接低分子量聚乙烯亚胺（PEI 2kDa），使其形成网状结构的高分子量PEI衍生物，可得到另一种新的阳离子聚合物，考察两种新合成的阳离子聚合物作为基因载体的性质特点。3．针对Survivin基因的4个不同的关键位点设计4条序列的siRNA，化学合成后，使用转染试剂转染耐药细胞，测定Survivin的mRNA水平，选择抑制效率最高的序列进行后续实验。ZOL-Pluronic的合成。4．载siRNA /多西他赛纳米胶束靶向递药系统的构建，以基本处方工艺为基础，以胶束的形态、粒径、稳定性和多西他赛的包封率、载药量为指标，优化处方和制备工艺。5．载siRNA /多西他赛纳米胶束体内外抗肿瘤活性。载药胶束对处于对数生长期的耐药细胞的毒性。利用小动物活体成像系统，观察胶束在小鼠体内的靶向性。评价胶束对移植瘤的抑瘤率。与国内外同类技术的比较：恶性肿瘤是严重威胁人类生命健康的三大疾病之一，中国年均癌症发病人数约350万人，死亡人数约250万人，而且发病率以每年2.5%的速度增加，需要花费的医疗费用高达上百亿元人民币。转移是癌症的一个致命过程，意味着患者的病情迅速恶化以至死亡。由于骨结构的特异性及其微环境，骨是肿瘤最易发生转移的部位之一，如前列腺癌、乳腺癌、肾癌、甲状腺癌和多发性骨髓瘤等晚期的骨转移率超过50%。针对恶性肿瘤骨转移，尚无好的治疗方法，基本以缓解临床症状、阻碍病情发展、提高生活质量、延长存活时间为原则。转移性骨瘤对化疗不敏感，而且往往伴有耐药性的问题。如何通过化疗手段有效的抑制转移性骨瘤的生长，是目前研究的热点之一。研究表明载紫杉醇（PTX）的聚合物胶束NK105和Genexol-PM、载顺铂（CDDP）的聚合物胶束Nc-6004、载SN-38（伊立替康的活性代谢物）的聚合物胶束NK012、载阿霉素（DOX）的聚合物胶束如SP1049C和NK911能够治疗转移性骨肿瘤，并且都已进入临床研究阶段。其中静脉注射用载DOX的混合胶束制剂SP1049C，在美国也已进入Ⅱ期临床试验，由0.25%的Pluronic L61和2%的Pluronic F127组成，主要用于晚期食道癌的治疗，其效疗显著，有着广阔的市场前景。针对转移性骨肿瘤化疗的难题，该研究设计一种主动靶向纳米胶束递药系统，拟以两亲性嵌段共聚物Pluronic（聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯三嵌段共聚物，PEO-PPO-PEO）作为DTX载体。Pluronic在水溶液中通过疏水力自发形成具有核壳结构的胶束，其外壳亲水，疏水嵌段组成的内核可以成为DTX储库，其粒径在纳米级，可以通过肿瘤具有特殊的高通透性和高截留性（EPR效应），实现被动靶向；外壳具有柔韧性和亲水性，具有长循环作用；生物相容性和安全性好。包封于Pluronic胶束中DTX可以避免MDR相关蛋白的识别、结合及外排，使DTX在肿瘤细胞内的蓄积增加。并将ZOL连接到胶束表面，利于其对骨组织超强的选择性和亲和力提高胶束的主动靶向性，同时ZOL与DTX可以起到协同抗肿瘤作用。再设计和筛选特异性靶向Survivin的小干扰RNA，通过胶束将其导入到肿瘤细胞中，阻断Survivin的表达，以达到促进肿瘤细胞凋亡和增加肿瘤细胞对化学抗肿瘤药物敏感性的目的。该研究创新性的提出了构建载siRNA/DTX靶向纳米胶束递药系统，该系统以ZOL作为靶向头基，利用其与骨组织的高度选择性和亲和力，实现骨部位的主动靶向；使用PEI修饰具Pluronic，ZOL连接在Pluronic上，以Pluronic-PEI和ZOL-Pluronic作为载体材料，包裹DTX形成阳离子纳米胶束，再通过胶束表面富集的正电荷吸附Survivin-siRNA。实验证明该给药系统在体内具有明显的靶向性，对移植肿瘤有较强的抑制作用。该研究构建的载siRNA/DTX靶向纳米胶束递药系统具有基因治疗、化疗和递释系统的多重优势，为有效治疗骨转移肿瘤提供了个可行的思路和方法，值得推广。 |
