地区：上海市 宝山区
关键词：上海市农业科学院;上海拓澳生物科技有限公司
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000001253
成果描述：
| 该项目属于生物与医药技术领域。 PRRSV是一种有囊膜的单股正链RNA披膜病毒，对多种巨噬细胞具有亲噬性，包括猪肺泡巨噬细胞(PAM)、外周血单核细胞、肺血管内巨噬细胞(PIM)等。激发高效的细胞免疫对预防PRRSV尤为重要。针对PRRSV感染的特点课题组应用与其具有相似的感染途径,并诱发相似的细胞免疫应答的辛德毕斯病毒作为疫苗载体来构建“自降解”PRRSV疫苗。辛德毕斯病毒载体主要用于肿瘤的靶向治疗，作为疫苗载体的研究已在流感疫苗的研制方面取得较好的效果，它克服了DNA疫苗的缺点，因此是理想，安全，有效的“自降解”疫苗载体。 主要技术发明内容：分离高致病性PRRSV病毒：PRRSV基因组RNA易变异，产生抗原漂变，因此用PRRSV野毒强毒株来扩增抗原基因。筛选无抗体依赖性病毒增强作用(ADE)的抗原决定簇：PRRSV病毒具有抗体依赖性病毒增强特性，用无抗体依赖性病毒增强作用的抗原决定簇构建疫苗可避免此现象的发生，从而提高疫苗的免疫效果。筛选SCP强启动子：依据哺乳动物基因启动子的特点，设计并筛选上游调控增强元件及核心启动子元件，增强基因转录水平，提高蛋白表达。构建“自降解”PRRSV疫苗：构建SCP强启动子调控的辛德毕斯病毒质粒载体，将无抗体依赖性病毒增强作用(ADE)的抗原决定簇基因插入到构建的表达载体中，添加信号肽编码基因，使表达的抗原蛋白分泌到细胞外，提高抗体应答水平。体外细胞转染实验鉴定抗原蛋白的结构及表达水平。动物免疫试验，动物攻毒试验：通过细菌高密度发酵制备，纯化病毒载体，配制疫苗。测定细胞免疫及体液免疫指标，优化疫苗剂量。最后用PRRSV强毒株攻击“自降解”PRRSV疫苗免疫过的猪，检验保护效果及保护期长短。设计新型DNAzyme拮抗PRRSV感染，证明新型DNAzyme具有很好的抗PRRSV作用。关键发明点：SCP强启动子的筛选；自降解辛德毕斯病毒载体用于PRRSV疫苗的研制；设计新型DNAzyme拮抗PRRSV感染；筛选无抗体依赖性病毒增强作用的抗原决定族。知识产权及应用推广情况：已获得授权发明专利2项，已发表文章18篇，其中SCI文章5篇，SCI文章被他人引用22次，国内文章被他人引用37次。在该项目工作的基础上，申请了上海市科委项目：猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型LAMP基因快速检测方法的建立，课题编号：14140900703，以及院青年基金项目：新型DNAzyme对PRRSV的抑制效果。该项目属于社会公益性应用基础研究，疫苗的研制及兽药审批流程时间长，此种新型疫苗还未上市，但是课题组课题研究的相关技术已被应用，上海拓澳生物科技有限公司应用课题组构建的复制型自降解辛德毕斯病毒载体表达胰岛素样生长因子；上海赛盛生物科技有限公司应用课题组构建的ESP超级启动子表达OCT4, sox2、klf4和nanog基因，诱导组织细胞，建立干细胞系，均获得一定的经济效益。 |
