地区：上海市 宝山区
关键词：温州医科大学附属第二医院;中山大学中山眼科中心
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000000341
成果描述：
| 该研究课题属于浙江省医药卫生科学技术计划外自选项目,在国家自然基金、温州市科技局等多个项目的资助下，课题组通过与广东中山眼科中心眼科学国家重点实验室玻璃体视网膜课题组合作，以免疫为切入点，从分子机制和细胞机制两个方面对PVR的发生发展进行系列机制研究；并从研究结果出发，提出针对性的靶向治疗措施，为防止PVR的发生发展提供了新的策略。从免疫角度，该课题发现Rag-1基因敲除型小鼠是一种非常理想的研究免疫功能在眼科作用的动物模型，并在国内外首先应用Rag-1基因敲除致免疫缺陷小鼠诱导PVR模型，发现特异性的免疫应答没有参与PVR的形成，明确了特异性免疫系统不参与PVR发生和发展，天然免疫参与了PVR的发生，解决了“免疫学变化是PVR产生的原因还是结果”这个长期争论的重要科学问题。从分子细胞和细胞机制角度，该课题组利用反转录(RT)PCR，蛋白质印迹分析和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)，对RPE细胞中PKC相关信号通路进行研究，该课题组国内外首次明确10种PKC亚型在人RPE细胞表达，并利用PKC转位的方法确定PKCα和PKCδ与人RPE细胞的细胞周期密切相关；在进一步研究中，课题组国内外首次证实通过PKCα负调控p27kipl来实现影响人RPE细胞的细胞周期进程和增殖，为RPE细胞发生转分化提供基因背景；关于PKCα亚型特异性激动剂Thymeleatoxin和特异性抑制siRNA-PKCα作用于人原代RPE细胞，通过划痕实验，transwell和活细胞动态观察系统等方法来说明PKCα亚型对RPE细胞转分化的影响，并通过免疫荧光、real-time PCR和电镜技术来观察细胞移行前和移行后细胞紧密连接蛋白表达的差异，证实PKCα对人RPE细胞的移行有上调作用，首次从细胞信号角度解答了RPE细胞转分化相关行为学改变机制。从靶向治疗策略角度，课题组发现PKC通过抑制RPE细胞的钙离子内流，可以抑制PVR的发生；在该基础上，利用人工玻璃体缓释系统，开展缓释PKCα抑制剂治疗PVR的研究，获得了体外PKCα缓释特征；进而从基因治疗角度证实玻璃体腔注射siRNA-PKCα可以有效地抑制Dispase诱导的实验性PVR发生；在系列实验研究结果中，课题组在国内外首次提出应用折叠式人工玻璃体系统缓释5-氟尿嘧啶、PKCα抑制剂，有望成为一种联合玻璃体手术来治疗或者预防增殖性玻璃体视网膜病变的新方法。该研究以课题合作方式，排除单从某一或几个致病因素来研究PVR，而不是以免疫变化为切入点，从分子机制和细胞机制等多个方面综合研究PVR的发病机制，并进行针对性的靶向干预PVR研究，课题新颖，研究方法先进，创新点鲜明突出。该项目研究结果发表10篇文章，其中7篇发表在影响力较高的SCI收录眼科学期刊，具有很高的理论价值与重要的现实意义；在PVR研究相关领域处于国际领先水平。 |
