地区：上海市 宝山区
关键词：凭祥出入境检验检疫局综合技术服务中心
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000005476
成果描述：
| 任务来源及背景：广西检验检疫局科技计划项目，项目名称，利用实时荧光PCR技术检测木薯细菌性枯萎病菌，项目编号2011K012。随着中国与东盟各国贸易合作的不断加深，贸易往来将更加频繁，会有更多的东盟各国的木薯种质材料及其产品等进入中国。为此，课题组必须加强对该病害的检测。但由于木薯细菌性枯萎病具有带菌不显症的特点，传统的植物检疫手段明显存在局限性。因此，建立准确、高效、快速的检测方法，对保证木薯繁殖材料或产品贸易的正常进行，保证中国的农业生产安全具有重要意义。技术原理及性能指标：通过检测荧光染料结合到DNA双链后水解发出的荧光，以检测DNA特异性扩增量，测定扩增产物的熔解曲线以检测扩增产物特异性。根据达到荧光阈值的循环数，即可判断检测目标的阴阳性。设计出了木薯细菌性枯萎病菌染料法实时荧光PCR检测的特异性引物Xtaqf：5’-ACCGCTTAAGTCAAGCTG-3’和Xtaqr：5’-CGCAACATCACTGAAACC-3’；建立了木薯细菌性枯萎病菌快速检测的方法：植物样本提取基因组DNA，三步法扩增，通过Ct值判断检测结果，Ct值<30为阳性，Ct值>30为阴性。通过扩增产物熔解曲线判断特异性，单峰为特异性扩增。技术的创造性及先进性：通过该研究，首次利用致病的木薯细菌性枯萎病菌质粒特有的酶切片段，确定了通过实时荧光PCR对该病原菌进行快速分子鉴定的方法。该项目通过综合试验所用菌株测定的序列和Genbank中已发布的序列，根据BamHI-EcoRI限制性酶切片段中的保守序列，设计出特异性引物Xtaqf/Xtaqr，并通过近缘菌株和感病植株检测引物特异性好，检测灵敏度高。技术的成熟程度，适用范围和安全性：由于木薯细菌性枯萎病菌属于检疫性有害生物，样本的收集比较困难，该研究只使用了一个菌株开展试验。该研究还需要进一步完善试验数据，使用不同菌株检测该研究所采用引物的特异性和检测效果。该技术具有安全、快速、高效、准确的特点。应用情况及存在问题：该研究属于应用研究的初步研究阶段，尚未推广应用。但该研究所采用的方法具有简单易行、快速高效的特点，可以肯定具有良好的推广应用前景。由于木薯细菌性枯萎病菌属于检疫性有害生物，样本的收集比较困难，该研究只使用了一个菌株开展试验。该研究还需要进一步完善试验数据，使用不同菌株检测该研究所采用引物的特异性和检测效果。同时，虽然该研究所采用的方法简单易行、快速高效，但由于不是所有的口岸实验室都具备进行实时荧光PCR实验的条件，因此推广应用上也有一定局限性。 |
