地区：上海市 宝山区
关键词：青岛市市立医院
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000004395
成果描述：
| 遗传因素在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）形成中起重要作用。PNPLA3等易感基因在调节体内脂质代谢方面具有重要作用，成为近几年研究的热点。该项目从人群水平探讨了PNPLA3、APOCⅢ、SAMM50、LEPR等基因多态性与NAFLD之间的相关性。同时，从“细胞-分子-动物”水平对PNPLA3I148M突变引发NAFLD的分子机制进行了深入研究。 人群水平：该课题组建立了中国汉族人群的NAFLD生物样本库，并对PNPLA3等易感基因与青岛汉族人群NAFLD的相关性进行了研究。首次证实PNPLA3I148M、SAMM50三位点（rs738491,rs2143571和rs3761472）多态性均与青岛汉族人群NAFLD显著相关，而APOCⅢ两位点（T-455C、C-482T）及LEPRK109R多态性与NAFLD无明显相关性。此外，利用经典的生物信息学工具分析MALDI-TOF-MS数据，建立了诊断NAFLD的肽组学模型，发现补体C3f及纤维蛋白肽A可能是NAFLD的潜在诊疗标记物。 细胞水平上，该课题组采用“简化的两步灌流”获得了足够数量的、高纯度、高活性的原代小鼠肝细胞；并成功构建携带PNPLA3基因野生型和I148M突变型完整编码序列的慢病毒载体，各自感染肝癌细胞系Huh-7和小鼠原代肝细胞，并证实PNPLA3蛋白野生型和突变型成功过表达。还发现PNPLA3I148M通过上调p53的表达可引起Huh-7细胞周期紊乱，且该突变通过过表达Huh7细胞中SREBP-1c进而引起TG的合成增加。 分子水平上，该课题组利用分子动力学模拟和柔性对接对PNPLA3I148M多态性对酶活性进行了深入研究。数据表明突变组允许底物进入催化中心的通道明显减小，从而限制了软脂酸进入催化二联体。酶与底物的结合能表明突变组对底物的低亲和力。另外，软脂酸在野生组和突变组的结合方式有显著不同。该研究为I148M影响酶活性的机制提供了有力的证据，并且对酶的催化腔进行干扰可能成为治疗NAFLD的潜在途径。 动物水平上，该课题组利用DNA原核显微注射技术，制备肝脏特异性表达的PNPLA3I148M多态性的转基因小鼠模型。对转基因小鼠进行了肝组织学观察和定量检测肝脏中的脂肪累积量，并首次结合转基因小鼠的代谢分析，跟踪检测临床上NAFLD患者相应的代谢指标，比较人与模型动物的差异。该项目已在国内外学术期刊上发表论文30余篇，其中SCI收录论文12篇。 该项目成果在上海交通大学医学院附属仁济医院、杭州师范大学附属医院、南方医科大学南方医院、温州医学院肝病研究所、吉林大学第一医院等多家单位推广应用，建立了NAFLD早期遗传分子学预警预测模型，应用于中国汉族NAFLD高危人群相关基因的筛查，对筛查阳性患者进行早期干预治疗，并从基因水平上对NAFLD的治疗提供新思路，取得了较大的临床价值和显著的社会效益。 |
