地区：上海市 宝山区
关键词：广西壮族自治区肿瘤防治研究所
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000002642
成果描述：
| 课题来源与背景：研究任务来源于《WWOX基因介导的卵巢癌生物学功能改变及临床应用研究》（广西卫生厅重点课题，合同编号：重200871）。卵巢癌是最严重的女性生殖道恶性肿瘤之一，易于盆腹腔广泛播散转移的肿瘤，就诊时70%的病例已属晚期。70%卵巢癌患者的5年内死因是肿瘤盆腹腔复发，其主要原因是铂类耐药而导致治疗失败。在妇科恶性肿瘤中，卵巢癌死亡率最高。WWOX是最近克隆的抑癌基因，它位于染色体16q23.3-24.1区域，跨越了整个常见染色体脆性位点FRA16D，与肿瘤的发生有关。有研究推测WWOX基因可能参与了卵巢癌耐药的调控。技术原理及性能指标：该研究利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测目的基因表达，进行DNA纯化、测序，测序结果，分析WWOX基因杂合性丢失与肿瘤发生的关系；RT-PCR技术、WesternBlot检测WWOX转染细胞及质粒转染细胞mRNA和蛋白的表达情况；黏附试验检测不同转染细胞对Fn(Fibronectin)介导的细胞黏附情况。应用α/β整合素介导的细胞黏附实验，筛选出与卵巢癌细胞黏附有关的整合素。利用筛选出的整合素，进行封闭卵巢癌细胞表面整合素的功能实验，分析整合素的表达情况与卵巢癌细胞浸润转移能力的关系。RNA干扰（RNAi）技术将WWOXsiRNA转染具有内源性WWOX基因表达的卵巢癌A2780细胞，黏附试验检测转染后细胞的黏附变化。利用RNA干扰（RNAi）技术逆转卵巢上皮性癌（卵巢癌）耐药细胞中WWOX基因的表达，探讨WWOX基因与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系，从基因角度探索逆转卵巢癌细胞多药耐药的途径，以期恢复卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性。qRT-PCR和northernblot方法检测分别及联合检测46例卵巢上皮癌，20例良性卵巢上皮肿瘤和20例正常卵巢组织中的p73、WWOX、p73与WWOX基因mRNA表达并分析与其临床病理的相关性，进行验证，分析WWOX基因与卵巢癌发生发展及耐药的关系。技术的创造性与先进性：WWOX基因杂合性丢失与肿瘤的发生有关；首次阐述WWOX基因能下调卵巢癌细胞对纤粘连蛋白(Fibronectin,Fn)的粘附力，并首次证实WWOX通过下调整合素α2、α3及β1的表达，降低肿瘤细胞粘附性，下调卵巢癌细胞的浸润和转移。建立卵巢上皮癌铂类耐药、铂类敏感细胞株A2780、SKOV3，首次证实了WWOXmRNA的高表达与卵巢上皮癌铂类耐药有关，WWOX介导了多药耐药，参与了卵巢上皮癌细胞的顺铂耐药进程，可能与WWOX基因及p73通路相关联。通过临床验证，证实WWOX基因与卵巢癌发生发展及耐药有关，可以作为判断卵巢癌浸润转移及多药耐药的标记物。社会经济效益，存在的问题：该项目培养硕士研究生4名。发表论文9篇，其中中华核心3篇、科技核心6篇。项目成果已在广西区内10余家医院进行了推广应用。通过该研究的完成及推广应用，在临床上有助于卵巢癌的诊断及预测卵巢癌黏附转移，判断卵巢癌多药耐药，指导制定及调整治疗方案，对患者进行个体化治疗，以达到最好的治疗效果，从而提高卵巢癌患者的预后，改善患者生活质量，具有较大的社会效益和学术价值。研究卵巢癌的铂类耐药是今后的研究的重点。今后一段时期，将争取更多基金资助进行以下研究工作：扩大病例进行临床研究；进一步探讨WWOX基因导致铂类耐药的分子机制，为卵巢癌的治疗提供理论依据。 |
