地区：上海市 宝山区
关键词：广西壮族自治区兽药监察所;北京勤邦生物技术有限公司;广西壮族自治区分析测试研究中心;广西皇氏甲天下乳业股份有限公司;广西壮族自治区粮油科学研究所
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000002619
成果描述：
| 课题来源与背景：该课题为广西科学研究与技术开发计划项目“畜禽安全生产关键技术研究与开发”所属课题“牛奶中抗生素药物和有害物质残留检测技术研究与示范”(桂科重1222003-2-3)，实施期限为2012年1月至2014年12月，由广西壮族自治区兽药监察所、北京勤邦生物科技有限公司、广西壮族自治区分析测试研究中心、广西皇氏甲天下乳业股份有限公司（现更名为：皇氏集团股份有限公司）、广西壮族自治区粮油科学研究所协作完成。研究开发出具有中国自主知识产权的抗生素及有害物质残留快速检测胶体金试纸卡并实现技术成果的产业化，以替代目前使用的进口产品及填补国内多残留快速检测试纸卡的空白，实现快速检测试纸卡国产化、打破进口产品垄断，并在该区进行应用示范以至推广至全国用于开展乳品安全检测工作。技术原理及性能指标：技术原理：抗生素药物分子抗原合成技术；单克隆抗体制备技术；单克隆抗体标记制备金标抗体技术；免疫亲和色谱技术；多残留检测技术。性能指标：研发的β-内酰胺类快速检测试纸条可同时检测牛奶中12种β-内酰胺类抗生素药物残留，检出限均符合在牛奶中的最大残留限量要求，以肉眼观察可判断检测结果，假阳性率低于5%、假阴性率为0，检测时间不超过15min，在2～8℃阴凉避光干燥条件下贮存，有效期可至12个月。研发的磺胺类快速检测试纸条右同时检测牛奶中12种磺胺类药物残留，氟喹诺酮类药物残留检测试纸条右同时检测牛奶中11种氟喹诺酮类药物残留，检出限均符合在牛奶中的最大残留限量要求。研发了磺胺类药物化学发光试剂盒、氟喹诺酮类药物化学发光试剂盒、Β-内酰胺类药物化学发光试剂盒3项，灵敏度、检出限、特异性等技术指标达到或接近国际同类检测技术水平。制定了国家标准1项（GB29689-2013食品安全国家标准牛奶中甲砜霉素残留量的测定高效液相色谱法）；制定了企业标准7项，均获备案批准。举办技术培训班5次，培训专业技术人员约310人。申请发明专利3项，已授权2项，受理1项；申请实用新型专利5项，已授权5项。发表学术论文8篇。完成了牛奶中β-内酰胺类抗生素快速检测等6种产品的小试、中试，并在皇氏集团股份有限公司的3个奶牛养殖基地开展了5种快速检测试纸卡的示范，推广应用到国内乳品企业和政府检测机构。技术的创造性与先进性：胶体金试纸条是应用胶体金标记技术，以胶体金作为示踪物，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫金标技术。其主要创新点如下：自主开发的磺胺类、氟喹诺酮类、β-内酰胺类、四环素类等胶体金试纸条，针对一类残留小分子物质的共性特点，对目标物分子结构改造和修饰，获得同类各药物分子共性决定簇特征结构及针对同一类物质的多靶标抗体，实现类特异性识别，实现多残留检测。填补了国内空白，集成度高，灵敏度和特异性等技术指标达到或部分优于国外同类产品。黄曲霉毒素M1试纸条产品。引入直接竞争酶联免疫法的反应模式，同等条件下与常规的小分子物质间接竞争酶联免疫检测法相比，减少了抗原抗体结合物与酶标二抗的反应时间，有效的缩短了反应时间和检测周期，显著地提高了检测速度，使得批内批间的误差可能性降低，提高了检测方法的精密度。试纸条产品主要以裸条和工作液的形式提供，裸条配备微孔条，能够最大的保证酶的活性，微孔中的金标抗体试剂与被检测的样本液能够充分反应，能明显提高对样本检测的灵敏度。氯霉素免疫亲和净化富集柱技术创新点：小分子抗原设计与合成。针对那些有差异的特征基团进行抗原的设计与合成，利用这些特征基团制备抗原亲和色谱柱来提纯抗体，避开共有结构的影响。工业化分离提纯特异性抗体的技术。采用小分子抗原亲和层析技术分离提纯抗体，可大规模批量将血清中的抗体特异性吸附，洗掉杂质蛋白后易于用温和的溶液洗脱出目标抗体。高密度、高容量的抗体与基质偶联技术。一是采用定向偶联技术和装柱式反应流程，抗体能够高密度地固定到填料上；二是采用抗原亲和纯化的目标小分子抗体原料和定向偶联技术，使亲和柱俘获目标小分子的效率显著增加。技术的成熟程度、适用范围和安全性：研发的磺胺类药物快速检测试纸条、喹诺酮类药物快速检测试纸条、β内酰胺类&四环素类药物检测试纸条、β内酰胺类药物检测试纸条、三聚氰胺检测试纸条、黄曲霉毒素M1检测试纸条等产品，具有高灵敏度、快速、简便、成本低、多种药物同时检测等优点，适用于乳品安全批批检测样本量大、检测快速、便于携带开展现场检测等相关要求。把产品的自主创新性与产品实用性的很好地结合，在整个检测过程中不需要孵育器配合检测，无需其他配套试剂、仪器，便于存放，易于携带，对于进行大量样本进行快速筛查检测、临时抽检时更为实用，大大降低了检测工作量，适合于乳品样本批批检测的广泛需求。氯霉素抗原净化富集免疫亲和色谱柱，将分析的对象从复杂的分析物中纯化和富集，提高分析的可靠性、准确性和检测的灵敏度。它既为质检、政府监督部门监控食品安全提供有效、可靠和准确的检测产品与服务，又为中国在生物分离技术领域创造一个工业化制备免疫亲和色谱技术的基础平台。牛奶中甲砜霉素药物残留的测定方法（高效液相色谱法），以国家标准（GB29689-2013）颁布实施，为检测机构和企业保障奶类产品的质量安全提供了可靠的技术支撑。应用情况及存在的问题：快速检测条产品已成功应用于国内大型、中小型乳品企业，乳品收购站，动物卫生监督所、农产品质量安全监测中心和畜牧产品质量检验检测等政府监管部门，在基层检测单位等进行广泛推广应用,实现产品销售收入近860万元，税前利润约182万元。课题组在皇氏集团股份有限公司根竹、上思、来宾3个奶牛养殖基地进行产品示范，共检测了1124份奶样。三年来，皇氏集团股份奶限公司的乳品生产质量逐年提高，产品生产量逐年增加。课题研究过程中所建立的检测方法于2013年、2014年向广西卫生与计划生委员会申报广西食品安全地方标准制订计划，均未被列入立项计划，技术成果转化为标准体系的研究有待加强。 |
