地区：上海市 宝山区
关键词：广西中医药大学
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000002057
成果描述：
| 课题来源与背景：慢性肾脏疾病发展的最终阶段是慢性肾衰竭，其基本病理改变是肾纤维化，肾纤维化是导致肾功能丧失的最主要病理生理过程。肾纤维化的发生发展与细胞信号转导通路密切相关。课题组前期研究表明三七注射液通过影响TGF-β1/Smads信号途径发挥抗肾纤维化作用，从而达到延缓肾衰竭的目的。研究目的与意义：该课题基于功能基因组策略，采用信号转导功能分类基因芯片，研究三七注射液对肾衰竭肾纤维化大鼠MAPK(ERK1/2、JNK、P38MAPK)、TGF-β1/Smads、JAK/STAT、PI3K/Akt等信号转导途径交叉对话的影响，筛查出与信号转导相关差异基因，对部分差异基因用RT-PCR和Western-blot进行分析鉴定，从信号转导网络调控角度明确三七注射液抗肾纤维化作用机制及靶点。主要论点与论据：采用右肾切除、尾静脉注射阿霉素的方法建立阿霉素肾纤维化大鼠模型。观察三七注射液对大鼠24h尿蛋白定量、肾功能、肾脏病理的影响，以及对肾组织ILK、MMP-7、TGF-β1、P38MAPK、α-SMA、E-Cadherin蛋白表达的影响。光镜结果显示，模型组大鼠出现肾间质纤维化，三七注射液组和三七总皂苷组大鼠小管间质病变减轻。模型组大鼠24h尿蛋白定量、血清BUN和Scr水平、肾小管间质病理评分增多，肾组织ILK、MMP-7、TGF-β1、P38MAPK、α-SMA蛋白表达上调，E-Cadherin蛋白表达下调，与假手术组相比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）；而三七注射液组和三七总皂苷组大鼠24h尿蛋白定量、血清BUN和Scr水平、肾小管间质病理评分降低，肾组织ILK、MMP-7、TGF-β1、P38MAPK、α-SMA蛋白表达下调，E-Cadherin蛋白表达上调，与模型组相比较，差异均有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）；三七注射液组和三七总皂苷组相比较，上述指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。基因芯片分析的结果显示，假手术组与正常组的基因表达模式类似，模型组的表达模式与其它组不同，三七注射液组和三七总皂苷组表达模式类似；与模型组相比，三七注射液组和三七总皂苷组涉及的MAPK通路基因差异表达倍数在0.7到1.2倍之间；三七总皂苷组和三七注射液组与纤维化相关的TGF-β信号通路基因表达倍数在0.7到1.2倍之间。理论成果主要有：基因芯片筛选出的差异基因为ILK、MMP-7、TGF-β1/P38MAPK。三七注射液具有抗肾纤维化的保护作用，其机制可能与影响肾小管上皮-间质细胞转分化过程有关。三七注射液的抗肾纤维化机制可能与抑制肾组织ILK、MMP-7的表达，保护肾小管基底膜，减少细胞外基质机制的形成有关。三七注射液具有良好的抗肾纤维化作用，其作用机制可能与阻断TGF-β1 /P38MAPK信号通路的活化，抑制ILK、MMP-7表达，减少肾小管上皮细胞EMT过程有关。创见与创新：在研究思路方面基于功能基因组策略，采用基因芯片，分析三七注射液对肾衰竭肾纤维化不同信号转导途径的影响，从信号转导网络角度阐明三七注射液对肾衰竭肾纤维化的多途径、多靶点治疗作用及可能机制，既符合传统中医理论的整体观念,又能符合现代科学的系统生物学的研究方法。在研究内容方面从整体、组织、细胞、基因、蛋白不同层次，将功能与形态研究相结合，全面探讨三七注射液对肾衰竭肾纤维化的治疗作用。在研究方法方面采用信号转导基因芯片，该芯片将微列阵技术与特定不同信号转导途径相结合,剔除了基因芯片上对研究对象毫无意义的基因，缩短研究时间，比使用高密度表达谱芯片更加有效便利。社会经济效益，存在的问题：明确三七注射液抗肾纤维化疗效，为临床广泛应用提供科学依据，开发其抗肾纤维化应用新领域，具有广阔的市场前景，开发广西特色药材田七注射液抗肾纤维化应用新领域，将广西资源优势转化为产品优势，对广西医药经济的发展起到促进作用，可产生巨大的经济效益。在省级以上学术刊物发表了相关论文4篇。协助培养博士研究生1名；培养硕士研究生11名，培养了一批中青年科研骨干。该项目研究工作较为顺利，达到了预期研究目标。但在动物造模的过程中，参与实验的研究生经验不足，一方面对大鼠注射阿霉素剂量掌握不好，另一方面大鼠尾静脉血管细小，尾静脉注射时易致阿霉素血管外渗，出现大鼠断尾现象较严重，最后导致大鼠大量死亡。后来重新购买第二批大鼠造模，经严格掌握阿霉素剂量及尾静脉注射阿霉素的操作技巧，显著减少了阿霉素血管外渗，大鼠基本无断尾现象，肾纤维化大鼠模型制作成功，故实验周期有所延长，影响了项目研究工作的后期进程。历年获奖情况：无。 |
