地区：上海市 宝山区
关键词：广西科技大学;柳州市渔业技术推广站
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000001966
成果描述：
| 罗非鱼是全球主要经济鱼类之一，具有生长快、抗病力与抗逆性强、肉质好、繁殖力强、适应性广以及群体产量高等一系列优点，现已成为南方各省出口型养殖规模最大的鱼类，产量占全世界的50％，罗非鱼产业对于增加就业机会、提高农民收入都有十分重要的意义。2009年以来，国内主要的罗非鱼养殖区爆发了非常严重的罗非鱼流行病，90%以上的罗非鱼养殖户出现不同程度发病，急性发病病例逐年增多，3～7天可造成整塘鱼死亡六到八成。患病罗非鱼在水面离群独游，游姿失衡，眼球突出，被养殖户形象的称为“突眼病”。病原分析表明引起罗非鱼“突眼病”的病原为链球菌，主要为海豚链球菌(Streptococcus iniae)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)。据统计，近几年因链球菌病导致罗非鱼产业的损失达20亿元，如何防治罗非鱼链球菌病已成为农业和渔业管理部门最为关注的问题。早期诊断是疾病预防的重要手段，该成果开发了一种快速简便、灵敏度高、特异性高的链球菌病原——无乳链球菌的半定量分子生物学诊断技术，利用该技术可在养殖过程中不通过病原菌的培养即可诊断鱼体内病原的数量变化，从而反映无乳链球菌感染鱼体的严重程度，养殖户可以根据感染情况采取适当措施提前预防。该研究为罗非鱼链球菌病的防治提供一种全新的思路和策略，对于预防链球菌病的爆发、提高农民收入有重要的实际意义，也是水产养殖业走向健康持续发展的重要途径。主要成果如下：确定了罗非鱼血液中无乳链球菌的浓度与患病程度间的关系＜10^5CFU/ml，罗非鱼表现出正常的生长状态，从外观看不出受到感染；10^5-10^7CFU/ml，罗非鱼表现出较明显的患病特征；＞10^7CFU/ml，罗非鱼已濒临死亡或已死亡。研发了一种罗非鱼无乳链球菌免培养半定量的诊断技术该技术的操作流程如下：(1)定期使用含有无乳链球菌的标准罗非鱼血液样品分别进行4次不同循环次数的巢式PCR，建立检测灵敏度的标准对照表，(2)通过鱼臀鳍抽血对待建罗非鱼进行血液采集，按1:1的比例与事先准备好的去离子水混合均匀，一般按500μl+500μl的比例进行混合。(3)使用与建立标准对照表时同批次的Taq酶对稀释后的血液样品进行4次不同循环次数的巢式PCR，巢式PCR的方法按常规操作即可。(4)对比步骤3中的实验结果和标准对照表，可大致判读待测罗非鱼血液中的无乳链球菌浓度，并确定患病程度。该方法所达到的技术指标如下：以纯培养微生物为检测对象，检出限＜10×10^3 cfu/ml；以血液检测对象，检出限10×10^4cfu/ml；从采样到完成检测的时间小于6h；诊断准确率大于95％。 |
