检疫性真菌DNA条形码识别技术研究与应用

地区:上海市 宝山区

关键词:宁波检验检疫科学技术研究院

成果类型:其它

成果领域:生物与新医药

成果编号:A2021061000001503

成果描述:

该项目针对植物病原真菌检疫鉴定中存在的参考物质缺失、准确识别技术不足、快速检测技术不准、检疫处理手段较少等诸多关键技术、瓶颈问题及空白领域,立足于提升真菌检疫能力及疫情监测水平,开展了系统的研究工作,获得多项成果并进行了应用,取得较大经济和社会效益:资源库的建立通过样品收集、分离、鉴定以及口岸截获等手段,建立了葡萄茎枯病菌、可可花瘿病菌、棉花黄萎病菌、苜蓿黄萎病菌等检疫性真菌以及近似种菌种库,保存菌株数量达1500余株;对不同检疫性真菌类群开展了生物学特性的研究,通过种类鉴定和克隆技术建立了标准株及标准质粒;初步解决了真菌检疫鉴定中缺少阳性对照的问题,使得口岸检疫与疫情监测工作水平有所提高。DNA条形码识别技术比较了8种不同DNA提取方法效率,获得了高效DNA提取方法和体系;筛选和评价了COI、ITS、LSR、SSR、BT、EF、ACT、MAPK等22个分子标记作为检疫性真菌DNA条形码的可能性。获得了通用性好、扩增性强、测序成功率高的7个分子标记。对轮枝菌属的研究表明,ITS成功区分了研究所涉及的10个种,其PCR扩增和测序成功率为97.1%,序列鉴定成功率为94.5%,有望作为轮枝菌条形码。实验室分子诊断技术基于对葡萄茎枯病菌、可可花瘿病菌、油棕猝倒病菌、向日葵黑茎病菌等的多基因DNA序列分析,建立了针对上述病菌的实时荧光PCR检测技术。应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了快速敏感的油棕猝倒病菌检测方法,实现了快速、灵敏、特异地检测油棕猝倒病菌,只需一台水浴锅就可以开展检测,非常适合基层现场检测。成果应用推广应用项目研究成果,项目主持单位先后全国首次截获葡萄茎枯病菌、可可花瘿病菌、向日葵茎溃疡病菌等多种检疫性真菌,国家质检总局据此向全国口岸发布警示通报3项,工作规范1项。研究了葡萄茎枯病菌和可可花瘿病菌的生物学特性以及室内药剂防效,为口岸检疫处理工作提供了依据。项目成果为10余个口岸局提供了技术支持,增收节支达2106.2万元,取得了显著地经济效益和社会生态效益,有效地保护了中国农业生产和生态安全。知识产权成果发表核心期刊以上代表性论文10篇;获得国家发明专利授权3项;制定国家标准1项,出入境检验检疫行业标准3项;自主研发各类试剂盒7种;培养高级技术人才3名,1人入选浙江省151人才工程。
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