地区：上海市 宝山区
关键词：绍兴市人民医院
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000000960
成果描述：
| 简要技术说明及主要技术性能指标Enterovirus 71（EV71）属于小RNA病毒科（Picornaradae）、肠道病毒属（Enterovirus）A组成员，可引起手足口病（Hand-foot-mouth disease，HFMD），它是以发热和手、足、口腔及臀部等出现皮疹和溃疡为主要临床特征的急性传染病。手足口病主要由肠道病毒71型（Enterovirus，EV71）和柯萨奇病毒A16型（Coxsackie A16，CA16）引起，严重病例90%以上由EV71引起，其已成为严重的公共卫生问题。该课题从EV71的危险因素分析、分子流行病学、抗原抗体检测方法、神经重症靶点分析、小鼠模型等方面进行系统研究，具体如下：该课题对手足口病患者标本进行EV71分离、鉴定、测序、分析，首次证实了绍兴地区主要为C4a亚型，为本市EV71流行规律、手足口病的防控提供科学依据，为EV71的发病规律，分子流行病学，传播动向，同源重组等提供重要科学依据。基于绍兴EV71流行株，课题组构建了包含VP1基因的pPET28a-EV71-VP1原核表达载体，表达纯化了VP1蛋白并用western-blot对其活性进行了检测。以此为目的蛋白建立了EV71乳胶凝集抗体检测方法。用2株针对VP1的单克隆抗体混合蛋白致敏羧化乳胶建立了EV71抗原检测方法。建立的EV71抗原抗体检测方法在临床及实验室水平进行了初步应用，该方法仅需1-2分钟即可出结果，远比现在临床常用的ELISA、Realtime PCR快速。该研究选取病毒分离株中来自重症患儿的毒株进行后续研究，通过高压尾静脉注射注射的感染方式，建立了成年小鼠的EV71模型。研究结果表明二次攻毒可以导致小鼠出现神经症状乃至死亡。且对雌性小鼠的生殖产仔能力造成显著性的影响。EV71具有理想的免疫原性，攻毒后的成年鼠抗体抗原高水平维持二年以上，子代鼠体内的母源抗体具有保护作用且可高水平持续。该研究提示，往往被忽略的成人的潜伏带毒可能是潜在的传染源，对与其密切接触的五岁以下婴幼儿构成严重威胁，特别是育龄期妇女的高滴度感染，可能影响孕产及胎儿健康。该研究首次发现并提出成年鼠EV71反复感染亦可致畸、致神经症状、致生殖损伤，研究结果为EV71的致病机理、小鼠模型、免疫接种等研究提供理论依据和全新视角。推广应用前景与措施该研究通过对手足口病患者标本进行EV71分离、鉴定、测序、分析，证实了绍兴地区主要为C4a亚型，且重症分离株与非重症相比无明显差异，VP1的170位点均为野生型的丙氨酸。为本市EV71流行规律、手足口病的防控提供科学依据，为EV71的发病规律，分子流行病学，传播动向，同源重组等提供重要科学依据。通过Meta分析了重症手足口病的危险因素，对于掌握手足口病毒的致病规律等具有重要意义。建立快速高效的EV71抗原抗体检测方法，为疫苗上市后免疫效果监测提供工具。揭示高神经毒性EV71导致病毒毒力增强的分子机理，为新型疫苗的研制提供理论依据和技术平台。为评估EV71感染对育龄期妇女的危害，建立小鼠感染模型，为EV71的致死致畸研究、疫苗免疫接种对象的选择等提供依据和参考。已发表相关SCI论文3篇，中文核心期刊1篇，国家授权发明专利1项。进一步的推广应用措施有：申报科研成果奖；申报省医药卫生成果转化类，并作推广；申报以该内容为主的省级或市级继续教育项目；参加学术交流会2次以上。 |
