地区：上海市 宝山区
关键词：温州医科大学附属第一医院;上海交通大学医学院附属新华医院;上海交通大学医学院附属第九人民医院
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000000333
成果描述：
| 该项目课题来源：浙江省中医药管理局。在该项目研究中，通过采用不同方法，验证了黄连素对巨噬细胞吞噬脂质能力，细胞泡沫化程度的影响，并从巨噬细胞清道夫受体(CD36,LOX-1以及CD68等)表达途径和促进细胞内胆固醇逆向输出途径(AEBP1-PPARs-LXRs-ABCA1)阐明了黄连素影响泡沫细胞形成的分子机制。主要研究内容如下：明确黄连素对巨噬细胞吞噬脂质能力及泡沫化程度的影响；明确黄连素减少巨噬细胞泡沫化的相关分子机制。该研究中，课题组项目的指标已经完成，情况总结如下：分别采用油红染色法观察巨噬细胞内脂滴形成情况，与空白对照组相比，oxLDL组可见巨噬细胞内大量的红色脂滴形成，提示巨噬细胞明显泡沫化；而不同浓度黄连素处理可抑制巨噬细胞吞噬oxLDL，减少泡沫细胞的形成。采用荧光Dil标记的oxLDL替代oxLDL处理巨噬细胞，流式细胞仪检测各组的Dil荧光强度，结果显示：与oxLDL组比较，黄连素组Dil荧光强度明显降低，提示黄连素组巨噬细胞对oxLDL吞噬减少。泡沫细胞的形成是由于细胞内胆固醇酯(CE)的积累而引起的，当细胞内CE量占总胆固醇(TC)的50％以上时就转变成泡沫细胞。对此，课题组采用高效液相色谱(HPLC)法测量细胞内微量CE的变化。结果显示，与空白对照组相比，oxLDL与巨噬细胞共培养24小时后，细胞内CE/TC值高于50%(68.03±1.76%vs.34.46±1.29%)，提示细胞泡沫化；而加入黄连素后，细胞内CE/TC的值逐渐下降，由62.37±2.51%下降至44.4±3.08%，具有显著性差异。阐明黄连素抑制巨噬细胞泡沫化程度的相关机制：⑴黄连素显著抑制巨噬细胞表面清道夫受体CD36和LOX-1的表达。⑵Adipocyte enhancer-binding protein 1(AEBP1)表达上调可通过影响PPARs-LXRs-ABCA1途径抑制脂质从细胞内溢出。该研究中发现，受oxLDL刺激后巨噬细胞AEBP1表达显著上调，呈浓度依赖性，而黄连素能浓度依赖性抑制其表达，提示黄连素通过抑制AEBP1调控途径促进巨噬细胞内脂质的溢出。已发表文章4篇，其中SCI收录论文5篇该项目的研究关键技术和创新点在于明确黄连素在巨噬细胞吞噬脂质，影响泡沫细胞形成方面的药理效应，并同时验证其效应的相关分子机制，尤其明确了黄连素对调控细胞内胆固醇逆向溢出的上游因子Adipocyte enhancer-binding protein 1(AEBP1)的表达影响，国内外均未见报道。该研究系在前期发现黄连素具有抗动脉粥样硬化炎症基础上进一步深入探讨其对泡沫细胞形成的影响，明确了黄连素可有效抑制单核源巨噬细胞泡沫化，并阐明其相关机制，为黄连素具有抗动脉粥样硬化作用提供新证据，为中医药在冠心病防治方面的应用提供依据，这对拓展黄连素的临床开发及应用具有重要意义。 |
