地区：上海市 宝山区
关键词：山东中医药大学附属医院
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000004322
成果描述：
| 新近研究发现，miRNA是基因调控网络的核心成分，在血管生成和心血管疾病中具有重要作用。益气活血中药能够促进缺血心肌的血管生成，但miRNA调控血管生成的细节尚未见报道。该研究以miRNA特异性和时序性为突破口，复制缺血/缺氧心肌微血管内皮细胞（CMECs）模型，运用miRNA芯片、real-timePCR分析血管生成过程中miRNA的动态表达谱，筛选核心miRNA，运用生物信息学技术预测靶基因，进而Westernblot检测靶基因、靶蛋白以及血管生成关键蛋白的表达，阐明缺血CMECs血管生成的miRNA调控规律。同时，制备芪参益气滴丸含药血清，基于miRNAs探讨益气活血中药干预的窗口效应、作用靶点及机制。 成功培养心肌微血管内皮细胞（CMECs），建立了缺血/缺氧CMECs模型，观察正常CMECs血管新生的增殖、迁移和成管窗口期分别为第3、1、2天，而缺血CMECs血管新生的增殖、迁移和成管窗口期分别为第6、1、2天。成功制备大鼠含药（芪参益气滴丸）血清，找出益气活血中药干预的最佳浓度，及其影响血管新生的增殖、迁移、成管窗口期分别为第2天、12小时、2天。明确血管生成过程中的关键miRNA为miR-223-3P,其在迁移期表达上调11.02倍、增殖期表达上调3.68倍，而应用中药后下调0.117倍，基因芯片分析结果与real-timePCR验证结果相同。运用生物信息学技术预测发现miR-223-3P是通过Rps6kb1/HIF-1αsignalingpathway-Rattusnorvegicus进而调节血管生成，Westernblot检测靶基因Rps6kb1发现其表达与miR-223-3P表达呈负相关，明确miR-223-3p的调节机理。应用益气活血中药干预后，基因芯片分析结果发现，益气活血中药下调了miR-223-3p的表达，进而影响血管新生。real-timePCR和Westernblot检测，验证了miR-223-3p和其靶蛋白表达分离现象，确定了miR-223-3p是影响血管新生的核心miRNA，明确其作用机理。 成功培养出大鼠缺血/缺氧CMECs，为广大实验室研究人员提供了一种简单易行的缺血/缺氧CMECs模型建立方式；发现CMECs的增殖、迁移和成管窗口期，为缺血CMECsmiRNA组学及药物干预研究提供实验依据，也为相关研究人员进一步研究提供参考；发现miR-223-3p是影响血管生成的关键、核心microRNA，并明确miR-223-3p调控网络，为缺血性心脏病的分子病理生理学研究及药物干预研究提供基础；明确了应用芪参益气滴丸后CMECs增殖、迁移和成管的窗口期，为益气活血中药临床治疗缺血性心血管疾病提供理论依据；明确益气活血中药干预缺血CMECs血管生成的机制，为进行益气活血中药对心脏微血管生理及病理干预机制的研究提供实验依据。 该项目已发表论文22篇，其中SCI论文2篇（IF：3.234、1.88），核心期刊论文14篇，临床医学硕士学位论文6篇，会议论文2篇。论文收录引用检索到戴国华发表的14篇中文论文被国内文献引用共计14次。已培养博士研究生1名，硕士研究生13名。 |
