地区：上海市 宝山区
关键词：广西特色作物研究院
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000001941
成果描述：
| 课题来源：由广西壮族自治区科学技术厅于2013年以桂财教[2013]19号文件下达，课题名称为《柑橘黄龙病潜在传播途径研究》，项目任务书编号2013GXNSFBA019110。研究目的与意义：该研究意在明确柑橘黄龙病病原菌在寄主植物花器和种子不同组织中的复制水平及柑橘黄龙病能否通过播种和授粉进行传播扩散，并对柑橘线虫和黑蚱蝉等新兴生物能否携带柑橘黄龙病病原菌及传播柑橘黄龙病进行研究与评价。对柑橘黄龙病潜在传播途径的研究将有助于课题组更多的了解柑橘黄龙病病原菌的生物学特性，并可为柑橘黄龙病的防控提供新的思路、理论依据和技术支撑。主要论点和论据：建立了一种柑橘黄龙病菌亚洲种的单管双引物对TaqMan探针荧光实时定量PCR (STDP-qPCR)方法，检测灵敏度可达1拷贝/μL。通过STDP-qPCR方法，明确了沙田柚花器及种子不同组织中的柑橘黄龙病菌亚洲种含量水平。分析比较了常规PCR、巢式PCR、SYBR Green I荧光实时定量PCR（SGI-qPCR）及STDP-qPCR等4种分子检测方法对柑橘黄龙病菌亚洲种的检测灵敏度，筛选出了具有最高检测灵敏度的STDP-qPCR方法（检测灵敏度为1拷贝/μL）。将感染柑橘黄龙病菌亚洲种的沙田柚种子进行播种，并用STDP-qPCR方法对苗木持续进行柑橘黄龙病菌亚洲种感染监测，研究结果表明，柑橘黄龙病不能通过带菌种子进行传播。通过保湿培养的方法对感染柑橘黄龙病菌亚洲种的琯溪蜜柚花粉进行了活力分析，结果表明感染柑橘黄龙病菌亚洲种的琯溪蜜柚花粉活力为50%。用感染柑橘黄龙病菌亚洲种的琯溪蜜柚花粉对健康温州蜜柑进行授粉，并用STDP-qPCR方法持续对授粉植株进行柑橘黄龙病菌亚洲种检测，研究结果表明柑橘黄龙病不能通过花粉进行传播。对来自黄龙病柑橘园的柑橘线虫和黑蚱蝉进行了柑橘黄龙病菌亚洲种检测，研究结果表明柑橘线虫和黑蚱蝉均无法携带柑橘黄龙病菌亚洲种。基于沙田柚花器及种子不同组织中的柑橘黄龙病菌亚洲种含量水平研究的结果，建立了一种基于雄蕊组织的柑橘黄龙病高准确性分子诊断方法，准确率可达93.8%。发现并报道了一种与黄龙病症状相关的植原体，并通过系统发生分析和模拟限制性片段长度多态性分析，明确了该植原体是植原体亚组16SrII-A中的一个变种（16SrII-A*）。通过与美国农业部农业研究服务署圣华金谷农业科学中心Hong Lin博士实验室合作，完成了柑橘黄龙病菌亚洲种中国（广西）菌株全基因组图谱的绘制（菌株编号GX-1，基因库登录号CP004005），为国际上完成的第二个黄龙病菌全基因组图谱，是中国首个被完成的黄龙病菌全基因组图谱。发明了一种柑橘黄龙病菌亚洲种聚合酶链式置换反应检测方法，检测灵敏度比常规PCR方法高100倍。创见与创新：明确了柑橘黄龙病菌亚洲种在柑橘种子和花器不同组织中的分布和含量水平。明确了柑橘黄龙病不能通过种子和花粉进行传播。报道了一种与柑橘叶片斑驳型黄化（黄龙病的典型症状）症状相关的16SrII-A*植原体。合作绘制中国首个柑橘黄龙病菌亚洲种基因组图谱。社会经济效益，存在的问题：通过将建立的柑橘黄龙病菌高灵敏性分子检测方法大规模应用于该区柑橘苗木出圃前黄龙病的检测，从源头部分把好关，有效地减少了广西因黄龙病带来的经济损失，对促进广西柑橘产业的可持续发展做出了积极贡献。该研究未有任何问题。历年获奖情况：该项目为首次报奖。 |
