地区：上海市 宝山区
关键词：广西壮族自治区兽医研究所
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000001932
成果描述：
| 课题来源与背景：致病性大肠杆菌是一种重要的人兽共患病原菌，其血清型复杂，无有效疫苗进行预防，只能采用抗菌药物治疗。中国每年抗菌药物总量的90%是应用在畜禽生产上，其中绝大部分的使用属于盲目无序。此外，在养殖生产中，抗菌药物还作为饲料添加剂来预防和促进动物生长，这些都导致了养殖环境中抗菌药物的大量残留，容易引起养殖环境的正常微生物菌群产生耐药性，耐药细菌通过水平传播将耐药基因传递给致病性细菌，使致病性细菌获得耐药性。该研究的实施将为养殖业合理使用抗菌药物作为饲料添加剂提供指导性建议，对减少养殖环境的抗菌药物残留，减少耐药菌株的出现具有极大的环境效益。为此，广西壮族自治区水产畜牧兽医局下达了科技项目《不同养殖模式下致病性大肠杆菌耐药基因调查及快速检测技术的示范》（桂渔牧科201528005），由广西壮族自治区兽医研究所承担实施，合同实施时间为2015年1月至2015年12月。技术原理：采集分离该区大规模养猪场、中小规模养猪场和散养户的致病性大肠杆菌，冻存备用。使用WHO推荐的K-B药敏纸片法测定致病性大肠杆菌对6类共24种抗菌药物的耐药表型。使用PCR方法对致病性大肠杆菌的β-内酰胺类抗生素、喹诺酮类、氨基糖苷类、磺胺类和酰胺醇类抗菌药的耐药基因进行检测。以新型动物专用抗菌药物氟苯尼考的耐药基因floR为靶基因，设计LAMP检测引物，进行特异性、敏感性等试验，建立一套快速检测氟苯尼考耐药基因floR的LAMP方法。对耐药基因与耐药表型的相关性进行分析。完成项目合同的性能指标：对分离至大规模养殖场、中小规模养殖场和散养户的猪源致病性大肠杆菌各60株，进行24种兽医临床常用抗菌药物的耐药表型检测；完成β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、大环内酯类抗生素、磺胺类和酰胺醇类抗菌药的耐药基因检测；建立快速检测氟苯尼考耐药基因floR的LAMP方法；申请并获得授权专利1项：检测细菌对氟苯尼考耐药性的LAMP方法（专利号：ZL20140118217.2）。已在中文核心期刊公开发表论文2篇。《大肠杆菌O157:H7对氟苯尼考耐药机制的初步研究》发表在《中国人兽共患病学报》2016年第3期；《大肠杆菌O157：H7体外氟苯尼考耐药诱导及对抗菌药物敏感性变化试验》发表在《中国畜牧兽医》2015年第12期。技术的创造性、先进性：首次对广西不同养殖模式下猪源致病性大肠杆菌对抗菌药物的耐药性进行调查研究，测定了大规模养殖场、中小规模养殖场和散养户各60株致病性大肠杆菌对24种抗菌药物的耐药表型，同时进行了6类抗菌药物8个耐药基因的检测，建立一套快速检测氟苯尼考耐药基因floR的LAMP方法，对比分析耐药表型和耐药基因的相关性，对比分析不同养殖模式下猪源致病性大肠杆菌的耐药差异，研究成果丰富了该区猪源致病性大肠杆菌耐药性监测的数据，为该区防治猪大肠杆菌病提供参考，为快速检测氟苯尼考耐药基因floR提供了新的方法，为快速检测其它耐药基因提供参考。技术的成熟程度，适用范围和安全性：该研究建立的快速检测氟苯尼考耐药基因floR的LAMP方法，该方法具有特异性强，灵敏度高，操作简便，结果判定方式便捷等特点，对于耐药基因监测具有重要意义。应用情况及存在的问题：项目实施过程中，样品采集的数量相对较少，样品来源没有全部覆盖全区，今后的研究中继续扩大样品来源范围，增加样品数量，使得研究数据更加丰富和更具有说服力，继续加大研究成果的使用推广力度，降低该区猪大肠杆菌病发病率和死亡率，减少经济损失，降低用药成本，减缓耐药菌株产生。历年获奖情况：无。 |
