地区：上海市 宝山区
关键词：广西壮族自治区肿瘤防治研究所
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000003919
成果描述：
| 该课题来源于广西自然科学基金面上项目：CDC25A 等基因在大鼠肝癌发生发展过程中的动态观察（2012GXNSFAA053167），研究期限2012-04-01至2015-03-31，申请广西自然科学基金资助经费5.00万元，由广西壮族自治区肿瘤防治研究所完成，于2016年07月08日结题。据国际癌症研究组织（IARC）最新的调查报告表明，肝癌在全球肿瘤死因中仅次于肺癌而位列第二；中国肝癌的年新发病例数和死亡病例数均占全球总数的50％以上，并且在未来20年还呈上升趋势；广西尤其是桂南地区是中国少数几个肝癌高发地区之一。乙型肝炎病毒（HBV）感染和和黄曲霉毒素B1（AFB1）在食品中的是污染是中国尤其是南方地区肝癌最重要的病因。虽然全世界几十年来在肝癌研究方面已投入大量的人力和财力，但其发病机制至今仍未得到充分阐释，其5年生存率无论是在发达国家还是在发展中国家均未超过5％。因此，开展肝癌相关的基础研究、探索其早期诊断和有效防治的靶标，对诠释肝癌发生发展机制和制定肝癌防治策略意义重大。该项目在前期工作中通过应用跨种属肿瘤基因筛选策略，初步筛选出CCNB1、MCM7和SMAD3等25个在人、树鼩、大鼠和小鼠等种属的肝癌中共同显示差异表达的基因；应用实时定量PCR、Western blot及免疫组化技术检测大鼠肝癌发生发展过程中不同时间点（10W、30W、50W、70W肝活检组织和最终形成的肝癌组织）肝组织内的CCNB1、MCM7和SMAD3基因在mRNA及蛋白表达水平的动态变化。构建MCM7基因表达载体和慢病毒RNAi表达载体，应用RNAi、基因转染技术和流式细胞仪检测技术，观察相关基因的表达水平改变后对人肝癌细胞系SMMC-7721和正常肝细胞系7702的增殖、凋亡等相关生物学功能的影响。研究结果认为在肝癌发生过程中，Cyclin B1表达随肝癌形成而升高，且在肝癌组织中表达最高，发现肝组织CyclinB1mRNA表达早期不明显，第73周时的表达水平明显高于第13、33、53周；但CyclinB1蛋白在诱癌早期表达变化不大，但至第53周时其表达水平呈增高趋势，在成癌的第73周表达水平最高；提示Cyclin B1蛋白表达异常可能是肝癌发生前的早期事件，可作为诊断早期肝癌的参考标志物之一，也为肝癌的基因治疗及治疗新靶点提供实验依据。同时，该研究验证了经跨种属策略筛选出的Smad3在人、大鼠和树鼩3个种属的肝癌组织中的mRNA和蛋白表达水平均呈现下调，提示Smad3与肝癌的发生发展密切相关，可能为肝癌发生发展过程中的关键分子之一，另一方面还提示Smad3可能发挥着抑癌基因的作用，但其具体机制仍有待进一步探讨。通过体外及体内实验进一步观察Smad3对肝癌细胞生物学行为及肝癌发生发展过程的影响，其中包括: 通过肝癌细胞体外实验观察Smad3过表达对肝癌细胞增殖及凋亡等生物学行为的影响，并应用Western blotting 及RT-PCR 等技术进一步明确Smad3与主要周期、凋亡相关基因的关系； 通过裸鼠人肝癌移植瘤实验进一步观察Smad3过表达对移植瘤生长和转移的影响，从而深入探讨Smad3作为防治肝癌靶点的可能性。阐明Cyclin B1及Smad3基因表达水平在大鼠肝癌形成过程中的动态变化；探讨候选的肝癌相关基因Cyclin B1及Smad3在肝癌发生发展中的作用和机制，提出这些基因作为肝癌的预防、早期诊断、病程预测的生物标志物和治疗靶点的可行性，为肝癌的防治提供科学依据；促进肝癌基础研究成果向临床应用转化；促进科研团队建设。在国内学术期刊发表论文2篇；培养研究生4名。该项目利用课题组前一课题通过跨种属跨病因的肝癌基因筛选策略，从大量已报道与肝癌相关的基因和蛋白中筛选出CCNB1、MCM7和SMAD3等基因，观察这些基因在大鼠肝癌形成过程中mRNA及蛋白表达水平的动态变化，并通过生物信息学分析，解析这些分子在系统信号网络中的作用和作为肝癌防治靶标的应用前景，为肝癌的防治提供科学依据。 |
