进出境海鱼异尖线虫幼虫感染状况分析及分子鉴别技术研究

地区:上海市 宝山区

关键词:舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心;浙江大学

成果类型:其它

成果领域:生物与新医药

成果编号:A2021061000001737

成果描述:

进出境海鱼异尖线虫幼虫感染及生态分布的初步研究为了解舟山进出境鱼类异尖线虫幼虫感染情况和评估人群感染潜在的危险性,对舟山口岸进出境鱼类和出口网箱养殖鱼类异尖线虫幼虫感染情况进行了调查。共检查舟山进出口海鱼1152尾,发现645尾感染异尖线虫幼虫,总感染率为55.99%(645/1152),发现检出10065条异尖线虫幼虫,总感染强度为15.60(10065/645)。根据上述调查结果显示,舟山进出境鱼类异尖线虫的感染率较高,生食本文所列的阳性海鱼时,应注意对异尖线虫病的预防。异尖科线虫rDNA ITS序列分析以进出口的鱼体内分离的、形态上未定种的12条线虫幼虫作为研究对象,以保守引物扩增rDNA的内转录间隔区(ITS)及5.8S序列。将PCR扩增出的片段纯化后克隆至pMD18-T载体,用菌落PCR和酶切鉴定阳性菌落,对阳性菌落进行测序分析。经分析后11个虫体实现了定种,有一种虫体由于缺乏相关基因序列资料未能实现区分,但从扩增片段与其他虫体区别较大,且与其他异尖科线虫序列差异较大,可以基本判定其不属于异尖科线虫虫种。结果证明ITS序列的确为理想的种间鉴定的遗传标记。PCR-RFLP方法鉴定进出口海鱼中的异尖线虫幼虫对异尖线虫单条线虫总DNA进行PCR扩增,获得其rDNA-ITS序列,测序后与基因库中DNA序列比较,并根据rDNA-ITS序列比较结果鉴定线虫的种类,最后通过酶切技术获得线虫的PCR-RFLP图谱并以此作为线虫鉴定的分子标签。建立异尖线虫虫种分子生物学检测体系,以实现对其快速准确的鉴定。
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