地区：上海市 宝山区
关键词：厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心;厦门市农产品质量安全检验测试中心;福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心;江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000006016
成果描述：
| 近年来，人们对肉奶的需求不断增加，从国外引进优良种牛包括奶牛、肉牛及牛繁殖材料等的数量呈现上升趋势，国内养牛业也在不断发展。但是国外动物疫情形势严峻，对中国的威胁不断加重，给检验检疫工作增加了难度；中国牛病监测体系还不完善，特别是牛的病毒性疾病，国内还没有国产配套诊断试剂，大部分需从国外购买，增加了成本，使检测工作难于开展，且国外进境试剂生产商较多，质量也参差不齐。为此迫切需要建立中国有自主知识产权的简便快速灵敏的牛病毒病检测方法。常见的牛病毒性疫病血清学检测方法包括补体结合试验、琼脂扩散试验、竞争酶联免疫吸附试验（CELISA）等；病原学检测方法有组织培养分离鉴定、免疫荧光、ELISA、免疫斑点试验、病毒中和试验、聚合酶链式反应等。为此，该项目针对牛病毒病检测技术需要，病原检测采用分子生物学技术，该技术是检测生物及临床样品中致病微生物基因组的一种快速灵敏的方法，建立了普通PCR、套式PCR、SYBR Green I荧光定量PCR和TaqMan荧光定量PCR检测牛传染性鼻气管炎；建立了套式RT-PCR、SYBR Green I荧光定量RT-PCR和TaqMan荧光定量RT-PCR检测赤羽病方法；建立了能同时检测这两种病毒的多重PCR方法和基因芯片方法；抗体检测采用当今最快速敏感的方法之一，即免疫金方法，牛传染性鼻气管炎抗体和赤羽病抗体检测采用斑点免疫金渗滤法，与ELISA进行对比，差异不显著，可是检测成本大为降低，不需要特殊的仪器，一般技术人员即可完成，可大大减少工作量，适应于口岸快速检测的需要。根据建立的检测方法研发的试剂组装成10种快速检测试剂盒，具有操作简便、快速、特异性强、稳定性好、灵敏度高、成本低、检测结果准确等特点，许多为国内外首次建立的检测技术，达到国际先进水平，在口岸部门、科研机构、农业检测机构和养殖企业得到普遍应用。该项目研发的试剂盒自2011年以来先后在江苏检验检疫局、福建检验检疫局、宁波检验检疫局、烟台检验检疫局、厦门检验检疫局和厦门市农检中心以及养牛企业等单位日常检测应用多年，大大减轻了检测成本，得到同行的高度认可，该试剂能够快速检测进出口种牛是否含有这两种病毒或抗体，可用于检验检疫部门的快速验放，动物卫生防疫部门的疫病普查和临床疑似样本的鉴定以及牛养殖场定期开展牛病毒病监测工作，可节省大量人力、物力和财力，对保护牛业养殖健康持续发展有着重要意义，具有较好的开发应用前景。该项目研发了10种检测试剂盒，准备向农业部申请新试剂，与企业合作，力争产品尽快规模化生产；申请了三项国家发明专利，其中两项已经授权；制订了1项国家标准和7项出入境检验检疫行业标准，并在进出境动物及其产品的日常检疫和国内动物防疫部门开展的动物及其产品疫病监控中发挥了重要作用，为出入境检验检疫部门和国内动物防疫部门提供技术依据。 |
