地区：上海市 宝山区
关键词：广西医科大学
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000005789
成果描述：
| 使用高频超声和弹性成像技术，借鉴乳腺影像报告和数据系统（BI-RADS），对壮族乳腺癌患者的术前超声征象、评分及诊断的准确性进行前瞻性研究。通过对研究对象的术后病理类型、组织学分级、HER2、ER、PR表达和BRCA1/2突变特点等进行分析，探讨乳腺癌超声征象与上述指标的关系，以期从无创的超声检查预测HER2、ER、PR表达和BRCA1/2的突变情况，达到初步评估患者病情发展和预后，对壮族人群乳腺癌的预防、早期诊断和实施个性化治疗，尤其对不能手术的患者制定诊断方案并观察疗效提供参考。研究壮族患者BRCA1/2突变的类型、频率等特点，为壮族乳腺癌的诊治积累分子遗传学的资料。研究样本的收集：收集广西地区乳腺癌患者约200例，其中壮族患者80例，汉族患者120例。所有患者术前抽取外周静脉血2mL，置入EDTA-K2一次性真空采血管中，记录患者姓名、年龄、抽血日期，-20℃冰箱保存。术前超声检查：使用GE LOGIQ E9彩色超声诊断仪，探头频率6～15MHz。检查时患者取仰卧位，双臂上举，充分暴露双侧乳房，发现病灶时记录病灶的数目、位置、大小、形态、边缘、纵横比、内部及后方回声、内部有无微钙化及有无腋窝肿大淋巴结等。采用彩色多普勒（color doppler flow imaging，CDFI）观察肿块内部和周边的血供丰富程度，参照Alder半定量法判断和记录病灶的血供情况，在血流较丰富处行PW取样检测血流速和阻力指数（resistance index，RI）。进入UE模式获取肿块硬度特征，根据罗葆明改良5分法进行弹性评分，1～3分为良性，4～5分为恶性。借鉴美国放射学会的乳腺影像报告和数据系统（BI-RADS）对常规超声检查结果规范评分后评级：Ⅰ级：阴性，未发现异常病灶；Ⅱ级：肯定为良性病变；Ⅲ级：可能为良性病变，3～6个月复查；Ⅳ级：可疑恶性，需组织活检；Ⅴ级：高度可疑恶性。该研究在结合UE评分对常规超声检查结果进行校准时主要依循以下原则：UE评分≤2分时，常规超声检查结果Ⅲ-Ⅴ级下调一级，其余不变；UE评分≥4分时，常规超声检查结果Ⅱ-Ⅳ级上调一级，其余不变；UE评分为3分时，常规超声检查结果不变。超声评级≥Ⅳ级为符合恶性肿块（癌）的诊断。病理及免疫组化检查：病理学检查和免疫组化测定由病理科医生完成。乳腺肿瘤的病理学分类方法参照WHO 2003年制定的分类方法。ER和PR0判定为阴性，(+)、(++)、(+++)判定为阳性；HER20或(+)判定为阴性，(+++)判定为阳性，(++)者再行荧光原位杂交(FISH)检验HER2基因有无扩增，有扩增者判定为阳性，无扩增者判定为阴性；ER、PR、HER2均阴性则定义为三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer, TNBC），其中任何一项阳性则定义为非TNBC。BRCA1基因突变的检测：参照经典的苯酚／氯仿抽提法稍改进后进行DNA提取。对BRCA1基因的全部编码序列进行扩增。PCR反应体系为：HotMaste Taq(2.5U/μL)0.5μL，Primer F(10μmol/L)1μL，Primer R (10μmol/L) 1μL，10×HotMaster Taq Buffer(含15mmol/L MgCl<,2>) 5μL，dNTP Mixture(2.5mmol/L each) 4μL，ddH<,2>O36.5μL，相对应的DNA 2μL，终体积为50μL。PCR程序：94℃2min→94℃20s→退火20s→72℃50s×30cycle→72℃5min→4℃。PCR引物的合成与PCR产物的纯化及测序均由上海生工生物工程技术服务有限公司完成，测序结果与Gene bank中的BRCA1标准序列（NM_007300.3）进行比对，如发现碱基改变，在排除SNP的情况下，经反向测序再次证实，可判定为突变。国内外对壮族人群乳腺癌BRCA1/2突变情况的研究尚属空白，同时也无BRCA1/2突变与乳腺癌超声征象关系研究的报道。该研究对广西地区壮族乳腺癌患者BRCA1突变频率及特点进行了研究，并分析了相关组织病理改变及超声影像学表现，填补了国内空白。 |
