地区：上海市 宝山区
关键词：柳州市工人医院
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000003865
成果描述：
| 课题来源与背景： 该项目来源于2012年广西壮族自治区科学技术厅桂财教[2012]第53号文件通知立项的广西自然科学青年基金项目（任务书编号：2012GXNSFBA053126）。课题旨在为辅助生殖医疗提高临床妊娠率提供有效的方法和可靠地依据。研究目的与意义： 研究目的：该研究从子宫内膜局部微环境网络的角度，探讨促排卵药物影响子宫内膜容受性的机制及补肾养血中药改善子宫内膜容受性的作用机制及靶点。研究意义子宫内膜容受性是妊娠建立的关键因素，其形成受严格的时空限制。不孕症妇女在接受IVF-ET时，无论有无排卵障碍，为了一次获得尽可能更多的卵泡，都需要应用超促排卵（COH）治疗。大量数据证据显示，子宫内膜容受性降低与促排卵药物的运用有关。在临床中作为经典的改善子宫内膜容受性药物：孕酮和雌激素一直在使用着，但多年以来IVF-ET临床妊娠率一直徘徊在30%左右，难以继续提高。子宫内膜容受性低下的根本病机为精血不足。针对这类病人，临床上运用补肾活血功效的中药治疗，取得了一定的疗效。中医药在改善子宫内膜容受性，提高辅助生殖周期妊娠率方面具有一定作用，但是机制不明。该课题即在该理论和临床经验的基础上，以促排卵小鼠受孕后的子宫内膜为研究对象，采用现代分子生物技术手段，从着床窗口期子宫内膜微环境角度探讨补肾养血中药改善子宫内膜容受性的机制。 主要论点与论据：论据（研究结果）： 胞饮突检测：使用扫描电镜(SEM)观察小鼠子宫内突，各组均以交配日后第4-5天表现最为典型。胚胎着床数：促排卵组胚胎着床数（6.83±1.94）显著少于自然周期组（11.50±1.05）、西药组（12.17±1.72）及中药组（11.83±1.94）胚胎着床数，差异具有统计学意义，P＜0.05。自然周期组、西药组及中药组胚胎着床数接近，差异无统计学意义，P＞0.05。 uNK-MIP1β-CD244蛋白表达部位：免疫组化结果显示，在交配日后各组小鼠子宫内膜MIP1β表达部位与uNK、CD244略有不同，前者主要表达于子宫内膜腺上皮细胞胞浆中，后二者在血管内皮细胞、子宫内膜腺上皮细胞以及间质细胞的胞浆中均有表达。免疫组化法检测窗口期uNK-MIP1β-CD244蛋白表达变化：在交配日后第2-7天，MIP1β在各组小鼠子宫内膜的表达均无明显变化，P＞0.05。自然周期组、西药组及中药组小鼠子宫内膜uNK、CD244在交配后表达水平逐渐升高，第4天水平达峰值，此后逐渐下降，差异显著，P＜0.05。提示小鼠子宫内膜uNK、CD244表达有明显时间规律性且相似。超促排卵小鼠子宫内膜在交配日后第2-7天uNK、CD244表达无明显变化，P＞0.05。 Western blot法检测窗口期小鼠子宫内膜MIP1β、CD244蛋白的表达：Western blot结果与免疫组化结果一致：提示在交配日后第2、4、7日，MIP1β蛋白在各组小鼠子宫内膜的表达均无明显变化，P＞0.05。自然周期组、西药组及中药组小鼠子宫内膜CD244蛋白表达在交配后第4天最高，明显高于第2、7日，P＜0.05。促排卵组小鼠子宫内膜在交配后第2、4、7日CD244蛋白表达无明显差异，P＞0.05。补肾活血复方中药及西药黄体酮均可恢复促排卵处理后小鼠子宫内膜CD244蛋白表达时序，且能显著提高CD244蛋白表达水平。 论点（研究结论）：小鼠子宫内膜容受性窗口期出现在交配后第4日。 促排卵药物影响子宫内膜容受性与扰乱子宫内膜CD244表达时序有关。该研究使用的补肾活血复方中药及西药黄体酮均可改善促排卵处理后小鼠胚胎着床率，同时均可改善小鼠子宫内膜CD244表达时序，且显著提高CD244表达水平。推测补肾活血复方中药及西药黄体酮均可通过纠正CD244表达紊乱改善子宫内膜容受性。该补肾活血中药可有效的改善小鼠胚胎着床率，且安全、有效，可供临床选择的使用。创见与创新：从子宫内膜局部uNK-CD244网络微环境不同时空表达的角度探讨子宫内膜容受性形成的机制。 项目发现窗口期小鼠子宫内膜中uNK、CD244时空表达具有一致性，提示窗口期存在uNK-CD244网络。 项目揭示了超促排卵药物影响子宫内膜容受性与扰乱子宫内膜uNK-CD244网络时序表达有关。 项目发现补肾活血复方中药、黄体酮可通过纠正uNK-CD244网络表达时序紊乱达到改善子宫内膜容受性的作用。社会经济效益，存在的问题：经济效益：该项目研究结果显示，补肾活血中药可有效的改善小鼠胚胎着床率，能有效改善子宫内膜容受性，且安全、有效，可供临床选择的使用。具有一定的经济效益。社会效益：项目揭示了超促排卵药物影响子宫内膜容受性机制，以及补肾活血复方中药、黄体酮改善小鼠子宫内膜容受性的作用靶点。项目结果为后续研究提供了很好的方向指引，社会效益巨大。 存在的问题：该项目原计划使用流式细胞检测技术检测促排卵模型小鼠受孕后子宫内膜uNK细胞的表达，实际执行中两次尝试进行试验，均未得出结果。分析流式细胞实验失败原因与杂质细胞过多导致因背景过高所致，今后可考虑先进行细胞分选，如免疫磁珠法初步分选出uNK细胞，去除杂质细胞后再进一步采用流式细胞检测技术检测uNK细胞的表达。该项目发现窗口期小鼠子宫内膜中存在uNK-CD244网络，促排卵药物可以引起该网络表达紊乱，补肾活血中药及黄体酮可通过纠正uNK-CD244网络表达时序紊乱达到改善子宫内膜容受性。今后可进一步从uNK、CD244网络角度深入研究。历年获奖情况： 无。 |
