地区：上海市 宝山区
关键词：广西壮族自治区药用植物园
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000003862
成果描述：
| 课题的来源及背景：2013年广西科学基金（青年基金项目）资助开展“三七中RNase-like贮藏蛋白基因克隆及表达”（2013GXNSFBA019087）课题研究，由广西壮族自治区药用植物园独立承担。研究的目的和意义：三七为主产云、桂地区的重要名贵中药材。三七根茎的蛋白质差异定量分析表明，RNase-like贮藏蛋白等差异表达蛋白质在其次生代谢及品质形成中发挥关键作用。该蛋白在红血细胞溶血方面具有抗补体活性、作为贮藏蛋白能增强对环境的适应性、构成gintonin糖脂蛋白参与广泛的生理过程等。克隆该蛋白相应基因对应深入其功能分析、三七种质品质及适应性改良具有重要意义。主要论点及论据：三七中RNase-like贮藏蛋白基因cDNA全长717bp（GenBank,kc751542）,DNA基因全长1074 bp，包含有3个外显子和2个内含子，编码238个氨基酸，含有核苷酸结合的保守区域，属于RNase-T2超家族成员；RNase-like贮藏蛋白基因在三七根、茎、叶等组织中均有表达，且在3年生根组织中表达量最高；体外表达显示RNase-like贮藏蛋白具有核酸酶活性。创见与创新：项目从基因水平上对三七中具有生物活性的蛋白进行研究，其结果可以为应用现代生物技术实现三七的遗传改良奠定基础。社会经济效益及存在问题：社会经济效益：项目为应用基础研究，暂不产生直接的经济效益。存在的问题：项目实施中发现， RNase-like贮藏蛋白在原核系统中可能受到细菌限制修饰系统的影响而不表达，在真核表达系统中表达量低，其最佳的诱导表达条件尚需摸索。历年获奖情况：未获得任何奖项。成果简介：项目采用同源克隆法和RACE技术相结合，从三七根茎总RNA中成功的获得了RNase-like贮藏蛋白基因（GenBank,kc751542），其ORF全长717bp， DNA基因全长1074bp，包含有3个外显子和2个内含子，编码238个氨基酸，含有核苷酸结合的保守区域，属于RNase-T2超家族成员；实时荧光定量PCR确定RNase-like贮藏蛋白基因在三七根、茎、叶等组织中均有表达，且3年生三七根中表达量最高；在毕赤酵母GS115中进行甲醇诱导分泌表达，纯化后的蛋白具有核酸酶活性。该成果可以为深入研究该蛋白质的酶活性、免疫定位等分子功能，以及通过遗传工程技术创制三七优良新品种奠定基础。 |
